uzluga.ru
добавить свой файл


Все о желтой и красной кровяных солях в гистохимии (Справка)


Все методы приведённые очень хорошие, они изложены ранее в классических руководствах по гистохимии, однако, наш опыт работы показывает, что окрашивание должно проходить только при температуре 50-60 С0 в термостате, срезы органов изготовлять только на замораживающем микротоме. при этом следует учитывать, что окрашивание приклеенных срезов к предметному стеклу ведет к окрашиванию стекла, желатины, альбумина и др. Наилучшие результаты дают рекомендации Г.Гайер 1974, где предлагают окрашивать тонкие кусочки органов. Мы более 20 лет пытались апробировать эти методы, по этому можем сказать, что только с учетом изложенных замечаний получаться все эти отличные методики.


Они хорошо на сайтах ряда лабораторий: Лаборатория экспериментальной патоморфологии, http://histopathology.narod.ru/documents/about_laboratory.html

^ Трехцветный метод выявления билирубина, Трехцветный метод выявления билирубина, по Гпеннеру 1. Срезы толщиной 10 мкм готовят в криостате, наклеивают на стекла и подсушивают при комнатной температуре.2. Погружают на 5 мин в 2 % раствор гексацианоферрата калия.3. Обрабатывают 20 мин свежеприготовленной смесью равных  частей 2 % гексацианоферрата калия и 5 % уксусной кислоты.4. Ополаскивают в проточной воде и обрабатывают в течение 15 мин 3 % раствором бихромата калия с рН 2,2.5. Промывают в воде.6. Окрашивают свежепрофильтрованным раствором жирового красного-О в изопропаноле 20мин. 7. Промывают в проточной воде в течение 5 мин.8. Заключают в сироп Апати.Результат: липофусцины окрашиваются в оранжево-красный цвет, гемосидерин — в синий, билирубин — в темный изумрудно-зеленый.Примечание. Гемосидерин растворяется в кислотах, поэтому для его выявления не следует применять кислые фиксаторы.

Железный» метод выявления меланина по Лилли1. Материал фиксируют в различных смесях, заливают в парафин.2. Депарафинированные срезы доводят до воды.3. Помещают в 2,5 % раствор сульфата железа гептагидрата на 60 мин.4. Промывают в 4 сменах дистиллированной воды по 5 мин.5. Помещают в 1 % раствор гексацианоферрита (III) калия в 1 % уксусной кислоте на 30 мин.6. Промывают в 1 % уксусной кислоте.7. При желании докрашивают пикрофуксином по Ван-Гизону.8. Проводят через спирт возрастающей концентрации и кси­лол, заключают в бальзам. Результат: меланин окрашивается в темно-зеленый цвет на бесцветном фоне; такой же цвет имеет гемосидерин.

Выявление кислотоустойчивых липофусцинов по Цилю—Нильсену 1. Материал фиксируют в различных смесях, заливают в парафин.2. Депарафинированные срезы доводят до дистиллированной воды.3. Окрашивают срезы в течение 3 ч при 60 °С в растворе карбол-фуксина (10 г основного фуксина + 50 г фенола + 100 мл спирта + 1000 мл дистиллированной воды). 4. Промывают в проточной воде. 5. Дифференцируют в 1 % солянокислом спирте до тех пор, пока эритроциты не станут розовыми.6. Промывают в дистиллированной воде.7. Докрашивают в железных квасцах или 0,5 % растворе то­луидинового синего.8. Промывают в проточной воде.9. Обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации, проводят через ксилол, заключают в бальзам. Результат: кислотоустойчивые липофусцины окрашиваются в ярко-красный цвет, а липопротеиды приобретают красно­ватый оттенок; ядра окрашиваются в темно-синий или синий цвет. Примечание. Из-за базофилии липофусцинов слишком сильная докраска обусловливает развитие темно-красного окрашивания. В присутствии фенола растворимость красителей в липидах повышается.

Метод Шморля для выявления липофусцина 1. Материал фиксируют в формалине, заливают в парафин или получают срезы на замораживающем микротоме.2. Срезы промывают в дистиллированной воде.3. Помещают срезы на 5 — 20 мин в реакционную смесь [3 части 1 % раствора дихлорида железа смешивают с 1 частью 1 % раствора гексацианоферрата (III) калия; смесь используют в течение 30 мин после приготовления].4. Срезы хорошо промывают в проточной воде. В особенно важных случаях рекомендуется проводить микроскопию срезов, заключенных в воду.5. Быстро обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации, проводят через ксилол, заключают в бальзам. Результат: липофусцин и меланин окрашиваются в темно-синий цвет. Кроме того, положительную реакцию дают аргентаффинных гранулы, а также ткани, содержащие активные SH-группы. Примечание. После п. 4 можно провести окрашивание ядер 1 % нейтральным красным в течение 3 мин

Источники:

http://histopathology.narod.ru/documents/gistohimija_pigmentov.html


http://narod.ru/disk/41206592001.2c11a72e4ad4c850d28b9905aedec6dc/Sarkisov.djvu.html

http://narod.ru/disk/4181175000/sravnitelnaja_gistologija.djvu.html


http://www.histopathology.narod.ru/LITERATURA/Multiple_Sclerosis_Immunology_Pathology_And_Pathophysiology.pdf

http://histopathology.narod.ru/documents/gistohimija_pigmentov.html


Другая лаборатория предлагает следующие методы:

Предложена специфическая реакция на медь, основанная на том, что под воздействием желтой кровяной соли образуется красная железистосинеродистая медь. Весьма чувствительным и специфическим методом выявления меди является реакция с дифенилкарбазидом. Срезы обрабатывают 10—20 минут смесью 10 см3 1-процеитиого спиртового раствора дифенилкарбазида и 100 см3 дистиллированной воды. Медь дает нестойкое красно-фиолетовое окрашивание. Можно пользоваться другим методом; фиксировать 96-градусиым спиртом или 10-процентным формалином при рН = 7; налить на стекло 0,5-процентиый раствор гематоксилина (рН = 7). Соединения меди окрасятся в синий или черно-синий цвет, гемосидерин — в коричневый или черно-коричневый. Способ не слишком специфичен и его следует контролировать другими методами. Источники:

http://soim.ru/metally/104-metally-med.html

кислые фиксаторы.


Гистохимическое выявление глутатиона

Маленькие кусочки ткани фиксируют в формалине (или в смеси Буэна) несколько часов (не более 24); быстро заливают в парафин (вся заливка — 4 часа); срезы очень тщательно моют дистиллированной водой для удаления формалина, затем проводят последовательно через три сосуда (в каждом по 20—25 минут), содержащих свежеприготовленную смесь химически чистых реактивов: 0,1-процентного раствора железосинеродистого калия—1 часть, 1-процеитиого раствора полуторахлористого железа — 3 части (не прикасаться металлическими инструментами). Тщательно промывают водой и заключают обычным образом в бальзам или, без обезвоживания, в сироп левулезы. Зоны, содержащие SH-группы, синие (мелкозернистый осадок). Источники:

http://soim.ru/metally/298-glyutation-i-gistoximicheskie-issledovaniya.html


^ Источники литературы:


Лилли Р . Патогистологическая техника и практическая гистохимия,

http://www.google.ru/url?sa=t&rct=j&q=%D0%BB%D0%B8%D0%BB%D0%B8%20%D0%B3%D0%B8%D1%81%D1%82%D0%BE%D1%85%D0%B8%D0%BC%D0%B8%D1%8F&source=web&cd=1&cad=rja&sqi=2&ved=0CCQQFjAA&url=http%3A%2F%2Furss.ru%2Fcgi-bin%2Fdb.pl%3Flang%3DRu%26blang%3Dru%26page%3DBook%26id%3D5559&ei=v7uZUPu8FfLc4QTxhYCwDQ&usg=AFQjCNENq2VkoD8lDzH6MFgLhr66hKvPNA


http://www.google.ru/url?sa=t&rct=j&q=%D0%BB%D0%B8%D0%BB%D0%B8%20%D0%B3%D0%B8%D1%81%D1%82%D0%BE%D1%85%D0%B8%D0%BC%D0%B8%D1%8F&source=web&cd=2&cad=rja&sqi=2&ved=0CCkQFjAB&url=http%3A%2F%2Fwindow.edu.ru%2Fresource%2F159%2F59159%2Ffiles%2Frazdel_3.pdf&ei=v7uZUPu8FfLc4QTxhYCwDQ&usg=AFQjCNEyn8Yvw1uHUeHpwr_axMJhWMlptQ


http://www.google.ru/url?sa=t&rct=j&q=%D0%BB%D0%B8%D0%BB%D0%B8%20%D0%B3%D0%B8%D1%81%D1%82%D0%BE%D1%85%D0%B8%D0%BC%D0%B8%D1%8F&source=web&cd=4&cad=rja&sqi=2&ved=0CDQQFjAD&url=http%3A%2F%2Fntb.dp5.ru%2Findex.php%2F-2%2F110128-lilli-r-patogistologicheskaya-texnika-i.html&ei=v7uZUPu8FfLc4QTxhYCwDQ&usg=AFQjCNGK-X_XyW0ThuAyQp-WxU75ozEXhQ


^ Луппа Х Основы гистохимии

http://www.google.ru/url?sa=t&rct=j&q=%D0%BB%D1%83%D0%BF%D0%BF%D0%B0%20%D0%B3%D0%B8%D1%81%D1%82%D0%BE%D1%85%D0%B8%D0%BC%D0%B8%D1%8F%20&source=web&cd=1&cad=rja&ved=0CCAQFjAA&url=http%3A%2F%2Fwww.medliter.com%2F013614-Osnovy_gistohimii_Luppa_H.html&ei=bbyZUKylFfT34QTcxYGwDw&usg=AFQjCNGxPpCppkfjEAQxHe8coffak60jKQ


http://www.google.ru/url?sa=t&rct=j&q=%D0%BB%D1%83%D0%BF%D0%BF%D0%B0%20%D0%B3%D0%B8%D1%81%D1%82%D0%BE%D1%85%D0%B8%D0%BC%D0%B8%D1%8F%20&source=web&cd=2&cad=rja&ved=0CCUQFjAB&url=http%3A%2F%2Fmedwuz.ru%2Fbooks%2Findexd102-2.php&ei=bbyZUKylFfT34QTcxYGwDw&usg=AFQjCNF1-0JdrLfvZNcDbjvMow6vgWZ1Kg


http://www.google.ru/url?sa=t&rct=j&q=%D0%BB%D1%83%D0%BF%D0%BF%D0%B0%20%D0%B3%D0%B8%D1%81%D1%82%D0%BE%D1%85%D0%B8%D0%BC%D0%B8%D1%8F%20&source=web&cd=4&cad=rja&ved=0CC8QFjAD&url=http%3A%2F%2Fbook-download-lib.ru%2Fbook%2F532189-skachat-gt-luppa-h-osn.html&ei=bbyZUKylFfT34QTcxYGwDw&usg=AFQjCNGzC-ZMz58Ydzm8S-oPNOVQ7ykewA


http://www.google.ru/url?sa=t&rct=j&q=%D0%BB%D1%83%D0%BF%D0%BF%D0%B0%20%D0%B3%D0%B8%D1%81%D1%82%D0%BE%D1%85%D0%B8%D0%BC%D0%B8%D1%8F%20&source=web&cd=8&cad=rja&ved=0CEcQFjAH&url=http%3A%2F%2Frazym.ru%2Fnauchmed%2Fgisto%2F152484-h-luppa-osnovy-gistohimii.html&ei=bbyZUKylFfT34QTcxYGwDw&usg=AFQjCNGg-bRgfuCFoDTdti-sM0i3_oHX-w


к.м.н. С.В. Зиновьев